技術文獻
動物血清的常見問題及處理方法!
血清是細胞培養(yǎng)中*重要的元素。在實驗室操作中要注意的事項及處理方法如下：
1. 血清保存 : 建議血清應保存在-5至-2O。然而，若存放于4時，請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶，建議您無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀龋俜呕乩鋬觥?/p>
2. 解凍血清的方法 : 建議您將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。
3. 血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理?
血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但*普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白)在血清解凍后，也會存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因。但這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質量。
若您欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內，以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因為它可能會阻塞您的過濾膜。
4. 為什么要熱滅活血清?
加熱可以滅活補體系統(tǒng)。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究，培養(yǎng)ES細胞，昆蟲細胞和平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。
5. 有必要做熱滅活嗎?
實驗顯示，經過正確處理的熱滅活血清，對大多數(shù)的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或完全沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量，而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點”，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37環(huán)境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。
6. 為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會出現(xiàn)沉淀?
胎牛血清沒有預老化，儲存在2-8時，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。這應該不會影響血清的質量。推薦在-20儲存胎牛血清，避免反復凍融。
7. 如何避免沉淀物的產生?
解凍血清時，請按照所建議的逐步解凍法(-20至4至室溫)，若血清解凍時改變的溫度太大(如-20至37)，實驗顯示非常容易產生沉淀物。
解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。
請勿將血清置于37太久。若在37放置太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害，而影響血清的質量。
血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。
若必須做血清的熱滅活，請遵守56，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。
注：以上資料僅供參考!
原創(chuàng)作者：本生（天津）健康科技有限公司
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