技術文獻
人腫瘤壞死因子α(TNF-α)elisa試劑盒使用說明
一、產(chǎn)品概述
人腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒是一種用于定量檢測人血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液等樣本中TNF-α含量的體外診斷試劑。本試劑盒基于酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)原理,通過特異性抗體與TNF-α結合,形成免疫復合物,再利用酶催化底物顯色的方法,實現(xiàn)對TNF-α的定量檢測。
二、試劑盒組成
本試劑盒包含以下組件:
1. 酶標板:包被有特異性TNF-α抗體的96孔板。
2. 標準品:已知濃度的TNF-α標準溶液,用于繪制標準曲線。
3. 抗體工作液:含有TNF-α特異性抗體的溶液,用于與樣本中的TNF-α結合。
4. 酶結合物:含有辣根過氧化物酶(HRP)標記的TNF-α抗體的溶液,用于形成免疫復合物。
5. 底物液:含有四甲基聯(lián)苯胺(TMB)的溶液,用于顯色反應。
6. 終止液:用于終止顯色反應的溶液。
7. 洗滌液:用于洗滌酶標板,去除未結合的雜質。
三、實驗原理
ELISA法檢測TNF-α的基本原理是:將TNF-α特異性抗體包被在酶標板上,形成固相抗體;加入樣本后,樣本中的TNF-α與固相抗體結合,形成免疫復合物;再加入酶結合物,與免疫復合物中的TNF-α特異性抗體結合,形成酶標記的免疫復合物;加入底物液,酶催化底物顯色,顏色深淺與TNF-α含量成正比。通過測定顏色深淺,可以計算出樣本中TNF-α的含量。
四、實驗步驟
1. 準備工作:將試劑盒從冰箱中取出,室溫放置30分鐘;按照實驗需要,準備好所需的試劑、樣本和實驗器材。
2. 加樣:在酶標板上設定標準品孔、樣本孔和空白對照孔,標準品孔加入不同濃度的標準品溶液,樣本孔加入待測樣本,空白對照孔加入等量的樣本稀釋液。
3. 溫育:將酶標板用封板膜封好,置于37℃恒溫箱中溫育30分鐘。
4. 洗滌:小心揭去封板膜,棄去液體,甩干,每孔加洗滌液,靜置30后棄去,如此重復5次,拍干。
5. 加酶:每孔加入酶結合物工作液,空白對照孔不加。
6. 再溫育:同步驟3。
7. 再洗滌:同步驟4。
8. 顯色:每孔先加入顯色劑A,再加入顯色劑B,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘。
9. 終止:每孔加終止液,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
10. 測定:以空白對照孔調零,用酶標儀在450nm波長下測定各孔光密度(OD值)。
五、結果計算與判讀
1. 結果計算:以標準品濃度為橫坐標,對應OD值為縱坐標,繪制標準曲線。根據(jù)樣本OD值,在標準曲線上查找對應的TNF-α濃度。
2. 結果判讀:若樣本OD值高于標準曲線上的濃度點,則應將樣本稀釋后再重新測定。結果以樣本中TNF-α的實際濃度表示,單位為pg/ml或ng/ml。
六、注意事項
1. 本試劑盒應在2-8℃保存,避免陽光直射和冷凍。
2. 試劑盒中的試劑應盡量避免交叉污染,不同批次的試劑不可混用。
3. 加樣時應使用一次性加樣器,避免重復使用造成誤差。
本生一直視質量控制為企業(yè)的生命,追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承:遵紀守法,嚴于律己,寬仁以待,敢于承擔的企業(yè)精神作為標準,以過硬的質量和優(yōu)良的服務來維護和拓展市場,較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作,共創(chuàng)美好的未來。
使用說明
一、產(chǎn)品概述
人腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒是一種用于定量檢測人血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液等樣本中TNF-α含量的體外診斷試劑。本試劑盒基于酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)原理,通過特異性抗體與TNF-α結合,形成免疫復合物,再利用酶催化底物顯色的方法,實現(xiàn)對TNF-α的定量檢測。
二、試劑盒組成
本試劑盒包含以下組件:
1. 酶標板:包被有特異性TNF-α抗體的96孔板。
2. 標準品:已知濃度的TNF-α標準溶液,用于繪制標準曲線。
3. 抗體工作液:含有TNF-α特異性抗體的溶液,用于與樣本中的TNF-α結合。
4. 酶結合物:含有辣根過氧化物酶(HRP)標記的TNF-α抗體的溶液,用于形成免疫復合物。
5. 底物液:含有四甲基聯(lián)苯胺(TMB)的溶液,用于顯色反應。
6. 終止液:用于終止顯色反應的溶液。
7. 洗滌液:用于洗滌酶標板,去除未結合的雜質。
三、實驗原理
ELISA法檢測TNF-α的基本原理是:將TNF-α特異性抗體包被在酶標板上,形成固相抗體;加入樣本后,樣本中的TNF-α與固相抗體結合,形成免疫復合物;再加入酶結合物,與免疫復合物中的TNF-α特異性抗體結合,形成酶標記的免疫復合物;加入底物液,酶催化底物顯色,顏色深淺與TNF-α含量成正比。通過測定顏色深淺,可以計算出樣本中TNF-α的含量。
四、實驗步驟
1. 準備工作:將試劑盒從冰箱中取出,室溫放置30分鐘;按照實驗需要,準備好所需的試劑、樣本和實驗器材。
2. 加樣:在酶標板上設定標準品孔、樣本孔和空白對照孔,標準品孔加入不同濃度的標準品溶液,樣本孔加入待測樣本,空白對照孔加入等量的樣本稀釋液。
3. 溫育:將酶標板用封板膜封好,置于37℃恒溫箱中溫育30分鐘。
4. 洗滌:小心揭去封板膜,棄去液體,甩干,每孔加洗滌液,靜置30后棄去,如此重復5次,拍干。
5. 加酶:每孔加入酶結合物工作液,空白對照孔不加。
6. 再溫育:同步驟3。
7. 再洗滌:同步驟4。
8. 顯色:每孔先加入顯色劑A,再加入顯色劑B,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘。
9. 終止:每孔加終止液,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
10. 測定:以空白對照孔調零,用酶標儀在450nm波長下測定各孔光密度(OD值)。
五、結果計算與判讀
1. 結果計算:以標準品濃度為橫坐標,對應OD值為縱坐標,繪制標準曲線。根據(jù)樣本OD值,在標準曲線上查找對應的TNF-α濃度。
2. 結果判讀:若樣本OD值高于標準曲線上的濃度點,則應將樣本稀釋后再重新測定。結果以樣本中TNF-α的實際濃度表示,單位為pg/ml或ng/ml。
六、注意事項
1. 本試劑盒應在2-8℃保存,避免陽光直射和冷凍。
2. 試劑盒中的試劑應盡量避免交叉污染,不同批次的試劑不可混用。
3. 加樣時應使用一次性加樣器,避免重復使用造成誤差。
本生一直視質量控制為企業(yè)的生命,追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承:遵紀守法,嚴于律己,寬仁以待,敢于承擔的企業(yè)精神作為標準,以過硬的質量和優(yōu)良的服務來維護和拓展市場,較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作,共創(chuàng)美好的未來。
原創(chuàng)作者:本生(天津)健康科技有限公司
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