技術(shù)文獻(xiàn)
elisa中,包被后需將酶標(biāo)板進(jìn)行洗滌和封閉步驟
在ELISA實(shí)驗(yàn)中,包被后需要將酶標(biāo)板進(jìn)行洗滌和封閉步驟。
洗滌步驟
洗滌的目的是去除未結(jié)合的包被液,以減少非特異性結(jié)合,提高實(shí)驗(yàn)的特異性。洗滌通常使用洗滌液(如PBST或PBS)進(jìn)行,每次洗滌后應(yīng)甩干或拍干,以確保酶標(biāo)板上的液體去除。洗滌的次數(shù)和洗滌液的用量根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)要求和酶標(biāo)板的類型而定,但通常需要進(jìn)行3-5次洗滌。
封閉步驟
封閉是為了封閉酶標(biāo)板上未被包被液占據(jù)的空隙,防止非特異性結(jié)合。封閉液通常為含有蛋白質(zhì)(如BSA或脫脂奶粉)的溶液,這些蛋白質(zhì)會(huì)填充酶標(biāo)板上的空隙,從而減少后續(xù)實(shí)驗(yàn)中非特異性結(jié)合的發(fā)生。封閉液加入后,通常在37℃下孵育一定時(shí)間(如1-2小時(shí)),然后進(jìn)行洗滌,以去除未結(jié)合的封閉液。
注意事項(xiàng)
在進(jìn)行洗滌和封閉時(shí),應(yīng)確保酶標(biāo)板的每個(gè)孔都得到充分處理,避免液體殘留或不均勻處理。
洗滌和封閉的條件(如溫度、時(shí)間)應(yīng)根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)要求和酶標(biāo)板的類型進(jìn)行調(diào)整。
在進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)操作,應(yīng)確保酶標(biāo)板干燥,以避免影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
通過正確的洗滌和封閉步驟,可以顯著提高ELISA實(shí)驗(yàn)的特異性和準(zhǔn)確性。
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原創(chuàng)作者:本生(天津)健康科技有限公司
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